图1 ｜模型组/假手术组蛋白质定量结果Figure 1 ｜Protein quantitative analysis between sham operation group and model group图注：图中红色点为显著性差异表达的蛋白，黑色点为无差异变化的蛋白

图2 ｜骨疏康组/模型组蛋白质定量结果Figure 2 ｜Protein quantitative analysis betweenGushukanggroup and model group图注：图中红色点为显著性差异表达的蛋白，黑色点为无差异变化的蛋白

图3 ｜模型组/假手术组GO 功能富集分析Figure 3 ｜Functional enrichment analysis of gene ontology between sham operation group and model group图注：BP 为生物过程；MF 为分子功能；CC 为细胞组分

图4 ｜骨疏康组/模型组 GO 功能富集分析Figure 4 ｜Functional enrichment analysis of gene ontology betweenGushukanggroup and model group图注：BP 为生物过程；MF 为分子功能；CC 为细胞组分

图5 ｜模型组/假手术组KEGG 通路富集分析Figure 5 ｜KEGG enrichment analysis between sham operation group and model group图注：富集到KEGG pathway 共14 条。P值颜色越深，富集的程度越高，相应的P值越小

图6 ｜骨疏康组/模型组KEGG 通路富集分析Figure 6 ｜KEGG enrichment analysis betweenGushukanggroup and model group图注：富集到KEGG pathway 共3 条。P值颜色越深，富集的程度越高，相应的P值越小

图7 ｜共同差异表达蛋白质相互作用网络Figure 7 ｜Co-differentially expressed protein interaction network

Mecp2 是一种能与甲基化DNA 特异性结合的甲基化调控蛋白[26]。文献报道，Mecp2 缺乏或突变可致骨小梁质量下降，骨矿物质含量和骨形成率相应减少[27]；也使得成骨细胞形态改变和数量减少，与骨形成相关的Ⅰ型胶原、Runx2 等mRNA 表达下降[28]。XIAO 等[29]首次建立人类B 细胞基因表达研究，实时PCR 证实了低骨密度与高骨密度组之间8 个基因的差异表达，研究证实低骨密度组中Mecp2 下调也与以往研究一致[30]。此次研究发现Mecp2 在模型组中表达下调，而在骨疏康组中表达上调，其表达趋势与其他蛋白不同，由此推测骨疏康可能通过提高Mecp2 的甲基化水平从而抑制骨量减少，具体机制有待进一步探究。Aldh3b1 是乙醛脱氢酶ALDH 家族成员，其功能与细胞内活性氧的清除相关。研究发现骨质疏松症与氧化应激密切相关[31]，绝经后妇女体内雌激素水平和抗氧化水平随着年龄增大而下降，机体内累积的活性氧无法及时清除，从而诱导了氧化应激的发生导致成骨细胞和骨细胞的损伤[32]。而ALDH 可以通过多种醛类代谢减少氧化应激。Ryr1 是骨骼肌中的主要Ca2+离子通道，严格调控正向和逆向的钙通量，对维持Ca2+稳态有着直接或间接的作用[33-34]，而钙稳态的失调可引发骨质疏松症等病理性结果。Myoz1 是一种主要在骨骼肌中表达的α-肌动蛋白和γ-丝氨酸结合的Z 线蛋白，影响肌纤维发育[35]。越来越多的研究证明肌肉与骨质疏松之间密切的病理机制，在骨质下降的同时一定程度影响骨骼肌含量[36-37]。此次研究中骨疏康组Myoz1表达上调，其表达趋势与其他蛋白不同，故推测骨疏康很可能通过上调Myoz1 表达水平影响骨骼肌含量从而起到骨保护作用。

从通路分析可见，骨疏康抗骨质疏松的分子机制与参与骨代谢的信号通路有关。酪氨酸是体内重要的氨基酸，已有文献表明氨基酸代谢利于骨质疏松症的治疗和预防[38]。同时酪氨酸是合成甲状腺素的主要原料，而过量的甲状腺素会引发骨质疏松症[39]。Jak/Stat 信号通路参与了胚胎形成、免疫反应、细胞增殖等生物学过程。相关研究表明一些炎症因子、激素可影响Jak/Stat 通路而导致骨代谢变化[40]。马铭等[41]研究结果发现炎症因子白细胞介素37 可能通过调节巨噬粒细胞集落刺激因子的表达和IL-6-JAK2/STAT3 信号通路的激活来抑制骨髓间充质干细胞的增殖并抑制成骨细胞的凋亡。也有不少中药复方通过调控该通路干预治疗骨质疏松症[42]，陈娟等[43]研究表明六味地黄丸可能通过上调JAK/STAT 通路中干扰素调节因子(IRF1)基因的表达，调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证免疫功能。长期酗酒或酒精中毒可引起骨密度的减少[44]，有研究发现腹腔注射过量的酒精可完全抑制胫骨干physi 端骨膜的形成，减少胫骨近端松质骨形成，提示了乙醇代谢与骨代谢的关系[45]。同时，大量酒精摄入对骨代谢表现出毒副作用，而这种毒副作用可能涉及促炎因子，氧化应激、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT/mTOR 和RANKL/RANK 等通路参与其中[46]。

综上所述，此次研究采用TMT 蛋白质组学技术及生物信息学分析方法分析了骨疏康胶囊对骨质疏松模型大鼠腰椎蛋白质的作用，筛选出差异表达的蛋白并分析，结果显示骨疏康胶囊可能通过调控差异蛋白及酪氨酸代谢、JAK-STAT 等重要信号通路参与保护骨质疏松模型大鼠的骨代谢过程。该研究为骨质疏松症的中医药治疗提供了新的靶点和研究新思路，对骨质疏松症的发病机制、新靶点药物开发、临床治疗等具有重要指导意义。

文章来源：《中国中医药图书情报杂志》 网址: http://www.zgzyytsqbzz.cn/qikandaodu/2021/0613/734.html